科研服務
SCIENTIFIC SERVICE
熒光定量PCR檢測/WesternBlot
熒光定量PCR檢測服務
1.服務描述
熒光定量PCR技術(Fluorescence Quantitative Real Time PCR，RT-PCR)是在常規PCR技術的基礎上引入了一種熒光化學物質。該熒光物質能夠隨著PCR反應產物的不斷累加，產生成比例的熒光信號強度。這樣就可以通過監測熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監測。目前，實時熒光定量PCR技術已經廣泛的應用于生物基礎科學研究、醫學臨床診斷、疾病研究及藥物研發等領域。本公司可根據您的科研需求，為您提供SYBR Green染料法或TaqMan探針法實時熒光定量PCR檢測服務。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監測, 實現對基因的相對定量、絕對定量和定性分析。
2.服務內容
1：mRNA 的定量分析：
熒光定量PCR可以利用內參基因對實驗基因的表達進行相對定量分析，也可以通過外用標準品對實驗基因進行絕對定量分析。
2：miRNA 的定量與定性分析：
MicroRNA(miRNA)成熟體是由21—23個堿基構成的含有發夾結構的單鏈小分子RNA，長度太短不能通過普通的實時定量PCR進行檢測。因此，我們通過加尾法(在miRNA的3’段加一個polyA尾巴)及頸環法(設計特殊的含有莖環結構的反轉錄引物，配合實時定量PCR引物及探針)可以精確檢測微量樣品中microRNA表達水平。
3：lncRNA的定量與定性分析：
長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)與mRNA相比是不編碼蛋白的，但又比miRNA要長(大于200nt)，研究證明ncRNA 能在表觀遺傳、轉錄及轉錄后水平上調控基因表達，與人類疾病的發生、發展和防治有著密切的聯系。我公司可設計特異性引物對lncRNA進行定量分析。
4：定性分析
熒光定量PCR還可以用來檢測單核苷酸多態性(SNP)、點突變、等位基因以及DNA甲基化等。能夠簡單快速地對目的基因進行高特異性、高靈敏度的檢測，同時閉管操作的實時檢測可以有效防止反應產物的污染。
3.主要過程
4.服務說明
1：在服務開始前，請先咨詢我們公司。我們會針對您的實驗目的設計個性化的最優實驗方案。
2：客戶提供的實驗材料必須在正確的條件下保存和運輸(上海本地客戶我們可以上門提取)。我們不推薦直接提供RNA或cDNA樣品，除非能證明提供的樣品質量可以用于熒光定量PCR。
3：客戶需提供盡可能詳細的實驗背景信息(包括物種信息，目的基因信息等)。
4：客戶可以自己提供熒光定量PCR引物，也可以由我們設計并合成，但需收取相應費用。
5：為了確保實驗數據的可靠性，每個樣品我們都采用三復孔，且保證熔解曲線的單一性。
5.服務周期
實驗周期視具體的樣品數量及需測定的數據數目而定。
6.客戶所得
1：熒光定量PCR的原始數據及分析結果;
2：完整的實驗報告(包括實驗材料，步驟，結果分析等);
WesternBlot 服務
1.服務描述
Western Blot 實驗首先通過變性聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳將蛋白質混合物進行分離，然后將其轉移至固相支撐物(NC膜，PVDF膜)上。這時的蛋白質是以非共價鍵形式吸附在固相支撐物上，固相支撐物經目的蛋白的一抗和酶標二抗孵育后，即可通過底物顯色來檢測目的蛋白的表達。該方法是蛋白質工程研究中的常規技術。
2.服務內容
1：樣品蛋白質的抽提與定量;
2：摸索，優化實驗條件并完成Western Blot 實驗;
3：圖片分析;
3.服務說明
1：我們接受任何形式的實驗樣品(組織、細胞及蛋白質混合溶液等);但客戶必須提供足量的滿足實驗要求的樣品。同時應注意避免樣品之間交叉污染，及樣品的反復凍融;
2：客戶需自己提供實驗用一抗，也可以由我公司代購(實驗完成后剩余抗體返還客戶);
3：我們采用PVDF膜作為固相支撐物，每張膜可以檢測10個蛋白樣品(包括蛋白質分子量標準)。
4.客戶所得
1：剩余的實驗樣品(包括客戶提供的一抗);
2：Western Blot曝光原始底片及處理后圖片;
3：完整的實驗報告;
